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                  组织蛋白酶V(CTSV)酶联免疫吸附测定试剂盒
                  发布时间:2021-10-26   点击次数:285次

                  检测原理

                  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被组织蛋白酶V(CTSV)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组织蛋白酶V(CTSV)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

                  样品收集、处理及保存方法

                  1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

                  2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

                  3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

                  4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

                  5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

                  自备物品

                  1. 酶标仪(450nm)

                  2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

                  3. 37℃恒温箱

                  操作注意事项

                  1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

                  2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

                  3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度

                  4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

                  5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

                  试剂盒组成

                  名称

                  96孔配置

                  48孔配置

                  备注

                  微孔酶标板

                  12孔×8条

                  12孔×4条

                  标准品

                  0.3mL*6管

                  0.3mL*6管

                  样本稀释液

                  6mL

                  3mL

                  检测抗体-HRP

                  10mL

                  5mL

                  20×洗涤缓冲液

                  25mL

                  15mL

                  按说明书进行稀释

                  底物A

                  6mL

                  3mL

                  底物B

                  6mL

                  3mL

                  终止液

                  6mL

                  3mL

                  封板膜

                  2张

                  2张

                  说明书

                  1份

                  1份

                  自封袋

                  1个

                  1个

                  注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、5、10、20、40、80 pg/mL

                  试剂的准备

                   20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

                  洗板方法

                  1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

                  2.  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

                  操作步骤

                  1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

                  2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

                  3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

                  4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

                  5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

                  6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

                  7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

                  结果判断

                   绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。


                  试剂盒性能

                  1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

                  2.  灵敏度:检测浓度小于1.0 pg/mL

                  3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

                  4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

                  5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

                  6.  有效期:6个月

                  免责声明

                  1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

                    严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。


                  上海瑞番生物科技有限公司

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